天津锦上实验设备有限公司

Becon贝康 ADOZ 免疫亲和柱（BC2369-3ml）

使用对象

Becon贝康 ADOZ免疫亲和柱（BC2369-3ml）能够特异性的纯化与浓缩样品中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、呕 吐毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮。Becon贝康 AOZ免疫亲和柱广泛地应用于粮食、食 品、饲料、坚果、花生、酱油、醋、辣椒、胡椒、药材和酒类等样品的提取，该方法速度快、 操作简单、准确性高，对准确灵敏的测定样品中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、呕吐毒素、 赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮起到十分重要的作用。

原理

       样品经 PBS 和甲醇提取液提取、离心、稀释，然后通过Becon贝康 ADOZ免疫亲和柱（BC2369-3ml）。此时，黄曲霉毒素、呕吐毒素、赭曲霉毒素 A 和玉米赤霉烯酮被亲和柱中的抗体特异性的吸附，用水或 缓冲液将免疫亲和柱上的杂质除去，然后用甲醇使抗体变性，从而将黄曲霉毒素、呕吐毒素、 赭曲霉毒素 A 和玉米赤霉烯酮从亲和柱上洗脱下来。，用 HPLC 或 LC/MS 进行定量检 测

储存条件

该亲和柱保存在2-8 °C条件下，不能冷冻，保质期为18个月。建议在室温（18-30°C） 下使用。

实验溶液制备

pH7.4 PBS 溶液：8.0  克 NaCl + 2.90 克 Na2HPO4 12H2O + 0.24 克 KH2PO4 + 0.2 克 KCl

加 990mL 纯水溶解，加纯水至 1 升。

液相色谱条件

1）黄曲霉毒素

色谱柱：Cloversil-C18 4.6*150mm（5um）或4.6*250mm（5um） 流动相：甲醇-水（45+55，v/v）

流速：0.8mL/min 检测器：荧光检测器，激发波长360nm,发射波长440nm 进样体积：20~100uL

光化学衍生化系统：光化学衍生器（连接于色谱柱后，然后通向荧光检测器）

2）赭曲霉毒素A

色谱柱：Cloversil-C18 4.6*150mm（5um）或4.6*250mm（5um） 流动相：乙腈-甲醇-水（99+99+2，v/v/v）

流速：1mL/min 检测器：荧光检测器，激发波长333nm,发射波长477nm 进样体积：20~100uL

3）玉米赤霉烯酮

色谱柱：Cloversil-C18 4.6*150mm（5um）或4.6*250mm（5um） 流动相：乙腈-甲醇-水（46+8+46，v/v/v）

流速：1mL/min 检测器：荧光检测器，激发波长274nm,发射波长440nm 进样体积：20~100uL

4）呕吐毒素

色谱柱：Cloversil-C18 4.6*150mm（5um）或4.6*250mm（5um） 流动相：甲醇-水（2+8，v/v），或乙腈-水（1+9，v/v） 流速：1mL/min

检测器：紫外检测器波长218nm 进样体积：20~100uL

分析步骤

Becon贝康 ADOZ免疫亲和柱（BC2369-3ml）的柱容量(吸附量)黄曲霉毒素，呕吐毒素、赭曲霉毒素A和玉米 赤霉烯酮分别为100ng，1000ng、100ng和1000ng，当样品中黄曲霉毒素，呕吐毒素，赭曲 霉毒素A和玉米赤霉烯酮超过测定范围时，请适当减小上柱体积，使其在检测范围内，计算 出准确含量。

  样品的提取及稀释

准确称取试样 10.0g 于 50mL 离心管中，准确加入 50mLPBS 溶液，震荡 60min。3000g 离心 10 分钟，将上层 PBS 液收集于干净的容器，通过槽纹滤纸过滤，将滤液收集于干净的 容器（提取液 A）。

向下层固体样品中加入 35mL 色谱级甲醇，摇床震动 60 分钟。3000g 离心 10 分钟， 取上层溶液 10mL 用 90mLPBS 溶液稀释。通过槽纹滤纸过滤，将滤液收集于干净的容器

（提取液 B）

样品的净化

将上步 50mL 提取液 B,以的流速 1-2 滴/秒全部通过 ADOZ 亲和柱,直至空气进入亲和柱。将 20 mL PBS 溶液以 1-2 滴/秒的流速通过亲和柱。直至空气进入亲和柱。将上步 5mL提取液 A,以的流速 1-2 滴/秒全部通过亲和柱,直至空气进入亲和柱。将 20 mL 纯水以 1-2 滴/秒的流速通过亲和柱。直至空气进入亲和柱。

      将 1.5mL 色谱级甲醇以 1 滴/秒的流速淋洗亲和柱，将淋洗液收集于玻璃试管中。当甲醇大 部分过柱后，不要完全过柱，停止加压，静置 5分钟。再将 1.5mL 色谱级甲醇以 1 滴/秒的 流速淋洗亲和柱，将全部淋洗液收集于同一玻璃试管中，供检测用。

注意事项

    1) 亲和柱净化后的洗脱液不能用尼龙膜或系膜过滤，负责会损失部分赭曲霉毒素。

2) 样品添加回收试验时，标准品添加到样品中，静置 2 小时后或过夜，再进行样品前处理， 否则会出现回收率偏低的现象。

3) 不要随便更改操作说明书中的操作步骤，如需更改要和本公司技术部联系，确认更改是 否合理。

4) 操作步骤中，样品过柱，淋洗，洗脱时，一定要控制好流速，不能太快，否则会使检测 结果偏低。

5) 试验中使用的玻璃仪器等，一定要清洗干净，尤其是用次氯酸等处理过的仪器，否则会 使检测结果偏低。

当用氮气浓缩洗脱液时，氮气流不要太大，否则会损失部分毒素含量

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